သတင်း

IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactoside) သည် အလွန်အမင်း မခံမယူနိုင်သော β-galactosidase အလွှာ၏ analogue တစ်ခုဖြစ်သည်။IPTG ၏ induction အောက်တွင်၊ inducer သည် repressor protein ဖြင့် ရှုပ်ထွေးသောပုံစံကို ဖန်တီးနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် repressor protein ၏ပုံစံကို ပြောင်းလဲသွားစေရန်၊ ၎င်းသည် target gene နှင့် ပေါင်းစပ်မရနိုင်စေရန်၊ နှင့် target gene ကို ထိရောက်စွာဖော်ပြပါသည်။ထို့ကြောင့် စမ်းသပ်မှုအတွင်း IPTG ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကို မည်သို့ဆုံးဖြတ်သင့်သနည်း။ပိုကြီးလေ ပိုကောင်းလေလား။
ဦးစွာ၊ IPTG induction နိယာမကို နားလည်ကြပါစို့- E. coli ၏ lactose operon (ဒြပ်စင်) တွင် β-galactosidase၊ permease နှင့် acetyltransferase တို့ကို အသီးသီး encode လုပ်သော structural genes သုံးခု၊ Z, Y နှင့် A တို့ပါရှိသည်။lacZ သည် lactose ကို ဂလူးကို့စ်နှင့် galactose အဖြစ်သို့၊ သို့မဟုတ် allo-lactose အဖြစ်သို့၊lacY သည် ပတ်ဝန်းကျင်ရှိ lactose ကို ဆဲလ်အမြှေးပါးမှတဆင့် ဖြတ်သန်းပြီး ဆဲလ်အတွင်းသို့ ဝင်ရောက်စေပါသည်။lacA သည် acetyl အုပ်စုအား acetyl-CoA မှ β-galactoside သို့ လွှဲပြောင်းပေးသည်၊ ၎င်းသည် Toxic effect ကို ဖယ်ရှားပေးပါသည်။ထို့အပြင်၊ Operating sequence O၊ စတင်သည့် sequence P နှင့် regulatory gene I တစ်ခုရှိသည်။ I gene code သည် operator sequence ၏ အနေအထား O နှင့် ချိတ်ဆက်နိုင်သော repressor protein တစ်ခုဖြစ်ပြီး operon (meta) ကို ဖိနှိပ်ထားပြီး၊ ပိတ်ထား။catabolic gene activator ပရိုတင်း-CAP binding site သည် အစပျိုးသည့် sequence P. P sequence၊ O sequence နှင့် CAP binding site တို့ကို အတူတကွ ဖွဲ့စည်းထားသည့် lac operon ၏ စည်းမျဉ်းနယ်မြေဖြစ်သည်။ဗီဇထုတ်ကုန်များ၏ ပေါင်းစပ်ဖော်ပြမှုကို ရရှိစေရန် အင်ဇိုင်းသုံးမျိုး၏ ကုဒ်ဗီဇများကို တူညီသော စည်းမျဉ်းနယ်မြေက ထိန်းညှိထားသည်။

lactose မရှိသောအခါ၊ lac operon (meta) သည် ဖိနှိပ်မှုအခြေအနေတွင် ရှိနေသည်။ဤအချိန်တွင်၊ PI မြှင့်တင်မှုအစီအစဥ်၏ထိန်းချုပ်မှုအောက်တွင် I sequence မှဖော်ပြသော lac repressor သည် RNA polymerase ကို P sequence နှင့်ချိတ်ဆက်ခြင်းမှကာကွယ်ပေးပြီး transcription အစပြုခြင်းကိုဟန့်တားသော O sequence နှင့်ချိတ်ဆက်ထားသည်။lactose ရှိသောအခါ၊ lac operon (meta) ကို ဤ operon (meta) စနစ်တွင် လှုံ့ဆော်ပေးနိုင်သည်၊ တကယ့် inducer သည် lactose ကိုယ်တိုင်မဟုတ်ပါ။Lactose သည် ဆဲလ်ထဲသို့ ဝင်ရောက်ပြီး β-galactosidase ဖြင့် ဓာတ်ပြုပြီး allolactose အဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲသည်။နောက်ပိုင်းတွင်၊ inducer မော်လီကျူးအနေဖြင့်၊ repressor ပရိုတင်းနှင့် ချိတ်ဆက်ပြီး O sequence နှင့် transcription မှ repressor protein ၏ dissociation ကို ဖြစ်ပေါ်စေသည့် ပရိုတင်းဖွဲ့စည်းပုံကို ပြောင်းလဲစေသည်။Isopropylthiogalactoside (IPTG) သည် allolactose နှင့် တူညီသောအာနိသင်ရှိသည်။၎င်းသည် ဘက်တီးရီးယားဖြင့် ဇီဝြဖစ်ပျက်ပြီး အလွန်တည်ငြိမ်သော အလွန်အစွမ်းထက်သော inducer ဖြစ်သောကြောင့် ဓာတ်ခွဲခန်းများတွင် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုပါသည်။

IPTG ၏ အကောင်းဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုကို မည်သို့ဆုံးဖြတ်ရမည်နည်း။ဥပမာအနေနဲ့ E. coli ကိုယူပါ။
အပြုသဘောဆောင်သော recombinant pGEX (CGRP/msCT) ပါရှိသော E. coli BL21 မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသောမျိုးကွဲကို 50μg·mL-1 Amp ပါဝင်သော LB အရည်ကြားခံအဖြစ်သို့ ဖောက်ထုတ်ပြီး 37°C တွင် ညတွင်းချင်း မွေးမြူသည်။အထက်ဖော်ပြပါ ယဉ်ကျေးမှုကို တိုးချဲ့ယဉ်ကျေးမှုအတွက် 50μg·mL-1 Amp ပါဝင်သော 50μg·mL-1 Amp လတ်ဆတ်သော 50mL လတ်ဆတ်သော LB အရည် 10 ပုလင်းထဲသို့ ထည့်သွင်းပြီး OD600 တန်ဖိုးသည် 0.6~0.8 ဖြစ်သောအခါ၊ IPTG ကို နောက်ဆုံးအာရုံစူးစိုက်မှုသို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့သည်။၎င်းသည် 0.1၊ 0.2၊ 0.3၊ 0.4၊ 0.5၊ 0.6၊ 0.7၊ 0.8၊ 0.9၊ 1.0mmol·L-1 ဖြစ်သည်။တူညီသောအပူချိန်နှင့် တစ်ချိန်တည်းတွင် induction ပြီးနောက်၊ ၎င်းမှ ဘက်တီးရီးယားဖြေရှင်းချက် 1 mL ကိုယူကာ ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်များကို အာရုံစူးစိုက်မှုဖြင့် စုဆောင်းကာ ပရိုတင်းဖော်ပြမှုအပေါ် မတူညီသော IPTG ပြင်းအားများ၏ လွှမ်းမိုးမှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် SDS-PAGE တွင် ချထားပြီးနောက်၊ အကြီးဆုံးပရိုတင်းဖော်ပြချက်နှင့်အတူ IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုကိုရွေးချယ်ပါ။
စမ်းသပ်ပြီးနောက်၊ IPTG ၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည် တတ်နိုင်သမျှ မကြီးမားကြောင်း တွေ့ရှိလိမ့်မည်။အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် IPTG သည် ဘက်တီးရီးယားများကို အဆိပ်အတောက်ဖြစ်စေသော အရာတစ်ခုကြောင့်ဖြစ်သည်။အာရုံစူးစိုက်မှု ကျော်လွန်ပါက ဆဲလ်များကို သေစေနိုင်သည်။ယေဘူယျအားဖြင့် ပြောရလျှင် ဆဲလ်ထဲတွင် ပိုမိုပျော်ဝင်နိုင်သော ပရိုတင်းဓာတ်က ပိုကောင်းမည်ဟု မျှော်လင့်သော်လည်း IPTG ၏ အာရုံစူးစိုက်မှု မြင့်မားလွန်းသောအခါတွင် အများအပြားပါဝင်မှု ပမာဏကို ဖြစ်ပေါ်စေမည် ဖြစ်သည်။ခန္ဓာကိုယ်တွင် ပျော်ဝင်သော်လည်း ပရိုတင်းပမာဏ လျော့နည်းသွားသည်။ထို့ကြောင့်၊ အသင့်တော်ဆုံး IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ပိုကောင်းသည်မဟုတ်သော်လည်း အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းလေဖြစ်သည်။
မျိုးဗီဇဆိုင်ရာ အင်ဂျင်နီယာမျိုးကွဲများကို ပျိုးထောင်ခြင်းနှင့် စိုက်ပျိုးခြင်း၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ ပစ်မှတ်ပရိုတင်း၏ အထွက်နှုန်းကို မြှင့်တင်ရန်နှင့် ကုန်ကျစရိတ်များ လျှော့ချရန် ဖြစ်သည်။ပစ်မှတ်မျိုးရိုးဗီဇ၏ဖော်ပြမှုသည် strain ၏ကိုယ်ပိုင်အချက်များနှင့်ဖော်ပြချက်ပလာစမစ်ကြောင့်သာမက inducer ၏အာရုံစူးစိုက်မှု၊ induction temperature နှင့် induction time ကဲ့သို့သောအခြားပြင်ပအခြေအနေများကြောင့်လည်းသက်ရောက်မှုရှိသည်။ထို့ကြောင့်၊ ယေဘူယျအားဖြင့်၊ အမည်မသိပရိုတင်းကို မဖော်ပြမီ၊ သန့်စင်ခြင်းမပြုမီ၊ သင့်လျော်သောအခြေအနေများကိုရွေးချယ်ပြီး အကောင်းဆုံးစမ်းသပ်မှုရလဒ်များရရှိရန် induction အချိန်၊ အပူချိန်နှင့် IPTG အာရုံစူးစိုက်မှုကို လေ့လာရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။