ထုတ်ကုန်များ

အဏုဇီဝအိမ်ရှင်၏ ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို နားလည်ခြင်းသည် ဆဲလ်တစ်ခုလုံးကို အခြေခံသည့် biocatalytic လုပ်ငန်းစဉ်များ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရန်နှင့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ရန်အတွက် မရှိမဖြစ်လိုအပ်သည်၊၊၎င်းသည်အိမ်ရှင်ရှိ cofactor/cosubstrate ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှု endogenous ကြောင့်ဇီဝဖြစ်စဉ်အရတက်ကြွသောဆဲလ်များကိုအသုံးပြုသည့် redox biocatalysis အတွက်အထူးသဖြင့်မှန်သည်။Recombinant Escherichia coli ကို a-ketoglutarate (a-KG) ဖြင့် cosubstrate အဖြစ် free L-proline ၏ hydroxylation ကို trans-4-hydroxy-L-proline အဖြစ်သို့ တိုးစေသော dioxygenase dioxygenase ကို အမြောက်အများထုတ်လုပ်ရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ဤဆဲလ်တစ်ခုလုံးဇီဝဓာတ်ပစ္စည်းများတွင်၊ ဗဟိုကာဗွန်ဇီဝဖြစ်စဉ်သည် လိုအပ်သော cosubstrate a-KG ကိုပေးဆောင်ပြီး P4H biocatalytic စွမ်းဆောင်ရည်ကို ကာဗွန်ဇီဝဖြစ်စဉ်နှင့် ဇီဝဖြစ်စဉ်လုပ်ဆောင်မှုတို့နှင့် တိုက်ရိုက်ချိတ်ဆက်ပေးသည်။ဇီဝဖြစ်စဉ်အင်ဂျင်နီယာနှင့် (13)C-ဇီဝဖြစ်စဉ် flux ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း ((13)C-MFA) ကဲ့သို့သော စမ်းသပ်နှင့် တွက်ချက်မှုဆိုင်ရာ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ဇီဝဗေဒကိရိယာများကို အသုံးပြုခြင်းဖြင့် ကျွန်ုပ်တို့သည် ဆဲလ်တစ်ခုလုံးရှိ ဇီဝကမ္မဗေဒဆိုင်ရာ၊ ဇီဝဖြစ်စဉ်နှင့် ဇီဝစွမ်းအင်တုံ့ပြန်မှုတို့ကို အရေအတွက်အားဖြင့် ဖော်ပြခဲ့သည်၊ ပစ်မှတ်ထားသော ဇီဝကူးပြောင်းမှုဆီသို့ နှင့် နောက်ထပ်ဆင်ခြင်တုံတရားလမ်းကြောင်းအင်ဂျင်နီယာအတွက် ဖြစ်နိုင်ခြေရှိသော ဇီဝဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ ပိတ်ဆို့မှုများကို ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ ပရိုလိုင်းပျက်စီးခြင်း-ချို့တဲ့သော E. coli မျိုးကွဲကို putA ဗီဇကုဒ်ဝှက်ထားသော ပရိုလိုင်းဒီဟိုက်ဒရိုဂျင်န့စ်ကို ဖျက်ခြင်းဖြင့် တည်ဆောက်ခဲ့သည်။ဤမျိုးသစ်မျိုးကွဲဖြင့် ဆဲလ်တစ်ခုလုံး ဇီဝအသွင်ပြောင်းခြင်းသည် ပမာဏပရိုလိုင်းဟိုက်ဒရိုစီရှင်းခြင်းကိုသာမက တောရိုင်းအမျိုးအစားနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သီးခြား trans-4-L-hydroxyproline (hyp) ဖွဲ့စည်းမှုနှုန်းကို နှစ်ဆတိုးစေသည်။မျိုးပြောင်းမျိုးကွဲ၏ ဗဟိုဇီဝြဖစ်ပျက်မှုမှတစ်ဆင့် ကာဗွန်အတက်အကျများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် လေ့လာထားသော အခြေအနေများအောက်တွင် တင်းတင်းကျပ်ကျပ် ထိန်းညှိထားသော TCA လည်ပတ်မှုအား ညွှန်ပြသော a-KG လုပ်ဆောင်ချက်အတွက် တိုးလာသော a-KG လိုအပ်ချက်သည် a-KG ထုတ်ပေးသည့် flux ကို မြှင့်တင်မပေးကြောင်း ဖော်ပြသည်။တောရိုင်းအမျိုးအစားမျိုးကွဲများတွင် P4H ပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့် ဓာတ်ပြုခြင်းတို့သည် ဇီဝလောင်စာအထွက်နှုန်းကို လျော့ကျစေသည်။စိတ်ဝင်စားစရာမှာ၊ ΔputA strain သည် TCA လုပ်ဆောင်ချက်ကို တိုးမြှင့်မည့်အစား ပြုပြင်ထိန်းသိမ်းရန် စွမ်းအင်လိုအပ်ချက်များကို နှိုင်းယှဉ်နိမ့်ပါးသော ဂလူးကို့စ်စုပ်ယူမှုနှုန်းဖြင့် ဆက်စပ်နေသော ATP နှင့် NADH ဆုံးရှုံးမှုကို လျော်ကြေးပေးခဲ့သည်။ ပြန်လည်ပေါင်းစပ် E. coli BL21(DE3)(pLysS) တွင် putA နောက်ကောက်ကျသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ biotransformation အထွက်နှုန်းအတွက်သာမက biotransformation နှင့် proline စုပ်ယူမှုနှုန်းများနှင့် စွမ်းအင်ရင်းမြစ်ပေါ်ရှိ hyp ၏အထွက်နှုန်းများနှင့် ထုတ်လုပ်မှုဆိုင်ရာ P4H ဓာတ်ပစ္စည်းများအတွက် ကတိပေးပါသည်။ရလဒ်များက putA နောက်ကောက်ကျသောအခါ၊ cosubstrate a-KG မှတဆင့် proline hydroxylation သို့ TCA-cycle ၏တွဲဆက်မှုသည် a-KG-dependent biotransformation ၏ထိရောက်မှုကိုပိုမိုတိုးတက်စေရန်အတွက်အဓိကအချက်ဖြစ်လာကြောင်းရလဒ်များကဖော်ပြသည်။